Abstract INTRODUCTION Brazilian spotted fever is an infectious disease with a high mortality rate if not treated early. Differential diagnosis is difficult, as the first clinical signs are non-specific and can be confused with other diseases. The aim of the study was to investigate evidence of infection with Rickettsia rickettsii and Rickettsia parkeri in negative sera samples, collected in 2014, from patients with suspected leptospirosis, dengue fever, and meningococcal disease in Atibaia and Bragança Paulista municipalities of the State of São Paulo. METHODS The samples stored at the Institute Adolfo Lutz in Campinas were tested using an indirect immunofluorescence assay (IFA) with IgG and IgM against R. rickettsii and R. parkeri. Real-time polymerase chain reaction (PCR) testing was performed for the sera samples of patients who died (n = 3), those with initial suspicion of meningococcal disease (n = 6), and those with positive IFA results. RESULTS Of 258 samples from Bragança Paulista, 4 (1.6%) were positive, with IgG titers of 1:64 and 1:128 against R. rickettsii and R. parkeri, respectively. Of 155 samples from Atibaia, 2 (1.3%) were positive, with IgG titers of 1:64 and 1:128 against R. rickettsii and R. parkeri, respectively. No sample showed positive PCR results. CONCLUSIONS This serological investigation suggests there is evidence of exposure to Rickettsia spp. in residents of areas that have environmental conditions favorable to the spread of bacteria, in which Brazilian spotted fever incidence was not previously confirmed.

INTRODUCTION : Brazilian spotted fever (BSF) is a disease transmitted by ticks for which the etiological agent is Rickettsia rickettsii. The present essay evaluates the risk factors associated with the transmission of cases of BSF in the time period between 2003 and 2013 in the Piracicaba river basin, state of São Paulo. METHODS : This essay presents a retrospective study to identify the factors associated with the transmission of cases of BSF among all suspected cases identified by the System for Epidemiological Surveillance of São Paulo (CVE). After the description of temporal distribution (onset of symptoms) and the environmental and demographic variations of the confirmed and discarded cases, a multiple logistic regression model was applied. RESULTS : We searched 569 probable locations of infection (PLI) with 210 (37%) confirmed cases of BSF and 359 (63%) discarded cases. The associated variables for the confirmation of BSF in the multiple logistic model using a confidence interval (CI) of 95% were age (OR = 1.025 CI: 1.015-1.035), the presence of Amblyomma sculptum in the environment (OR = 1.629 CI: 1.097-2.439), the collection of ticks from horses (OR = 1.939 CI: 0.999-3.764), the presence of capybaras (OR = 1.467 CI: 1.009-2.138), an urban environment (OR = 1.515 CI: 1.036-2.231), and the existence of a dirty pasture (OR = 1.759 CI: 1.028-3.003). CONCLUSIONS : The factors associated with the confirmation of BSF cases included an urban environment, age, presence of the A. sculptum vector, the collection of ticks from horses, the presence of a capybara population, and a dirty pasture environment.

Foi pesquisada a presença de riquétsias em 3.545 carrapatos Amblyomma cajennense e 2.666 Amblyomma dubitatum. Através do teste de hemolinfa, reação em cadeia pela polimerase e isolamento de rickettsia em cultivo celular, todos os Amblyomma cajennense foram negativos, sendo que 634 (23,8%) Amblyomma dubitatum mostraram-se infectados com Rickettsia bellii.

The presence of rickettsial infection was surveyed in 3,545 Amblyomma cajennense ticks and 2,666 Amblyomma dubitatum ticks. Using the hemolymph test, polymerase chain reaction and isolation of Rickettsia in cell cultures, all of the Amblyomma cajennense were negative, whereas 634 (23.8%) of the Amblyomma dubitatum ticks were shown to be infected with Rickettsia bellii.

Doenças transmitidas por carrapatos vêm sendo um importante problema de saúde pública no mundo. A Febre Maculosa Brasileira (FMB) representa um sério risco epidemiológico devido às altas taxas de letalidade apresentadas. As capivaras são freqüentemente incriminadas como possíveis reservatórios no ciclo de transmissão da FMB. Nas últimas décadas o número desses animais cresceu intensamente e eles invadiram os espaços humanos. As capivaras intensificam o contato entre carrapatos e seres humanos na medida em que se apresentam muito infestadas por estes parasitos. O objetivo deste estudo é contribuir para o conhecimento do possível papel desempenhado por este roedor na epidemiologia da FMB em algumas áreas da região de Campinas, SP. Foi estudada a infecção das capivaras por rickettsias do grupo da FMB, por meio da análise das freqüências de anticorpos contra este grupo, nestes animais, e dados da vigilância epidemiológica de casos humanos. A freqüência desses anticorpos variou amplamente entre as localidades, entretanto, só foram encontrados soros com anticorpos com titulagem =64 naquelas onde havia notificação de casos humanos. Estes achados sugerem que a capivara poderá ser um animal sentinela. No entanto, devido à ocorrência de reação cruzada entre os microorganismos do grupo de FM estes resultados devem ser interpretados com cautela e são necessários métodos capazes de distinguir rickettsias patogênicas.

Diseases transmitted by ticks have been an important health problem all over the world. Brazilian Spotted Fever (BSF) stands for a serious epidemiological concern due to the high mortality rates pointed out. Capybaras are commonly incriminated as possible reservoirs in the BSF transmission cycle. In the last decades the numbers of these animals raised sharply and they have invaded human areas. They intensify the contact between ticks and humans beings. This study aim is to contribute to the possible role performed for this rodent in the BSF epidemiology in some areas located in Campinas region, São Paulo. Cabybaras infected by rickettsiae of BSF group were studied through the analysis of the frequencies of BSF-group rickettisae antibodies titer = 64 by indirect immunofluorescence test (IFA), and data from human cases epidemiological surveillance. The serum frequency positiveness varied greatly according to areas where animals were captured. However it was found serum positiviness only in the areas where human cases of BSF were reported. These findings suggest the capybara may be seen as sentinel animal. Due to presence of serological cross reactivity between microorganisms belonging to SF group, the results must be interpreted carefully and additional methods to distinguish pathogenic rickettsiae are required in our country.

O objetivo deste estudo foi determinar os valores hematológicos de 14 capivaras de vida livre capturadas nos municípios de Campinas, Monte Alegre do Sul e de São João da Boa Vista. Para a obtenção das amostras de sangue, os animais foram anestesiados via intramuscular, mediante associação de cloridrato de xilazina 2% e cloridrato de ketamina 1%, em doses de 4,5mg/kg/pv e 5,0mg/kg/pv, respectivamente. O sangue foi coletado em tubos contendo EDTA. Para a determinação dos números de eritrócitos e leucócitos, foi utilizada a metodologia tradicional da câmara de Neubauer. O hematócrito foi determinado pelo método de microhematócrito e a hemoglobina pelo método da cianometahemoglobina. Para a contagem diferencial de leucócitos, foi utilizada a técnica de Shilling. Os índices hematimétricos (VCM, HCM E CHCM) foram determinados com os valores encontrados na série vermelha. Os resultados da série eritrocitária foram: 4,5 x10(6)/miL ± 0,2; hemoglobina: 13.5g/dL ± 0,7; hematócrito: 40,4% ± 2; VCM: 90,2 fL ± 0,9; HCM: 30,1 pg ± 0,7; CHCM: 33,3g/dL ± 1. Na série leucocitária: 5,3 x10³/miL ± 2; bastonetes: 1 % ± 2,1; segmentados: 36,6 % ± 19,9; eosinófilos: 3,5 % ± 11,7; basófilos: 0%; linfócitos: 58,8 % ± 19,6; monócitos: 1,5% ± 2,1. Não foram encontrados os mielócitos e metamielócitos.

The purpose of this study was to determine the hematological values of fourteen free life capybaras captured in three cities of São Paulo State, Brazil (Campinas, Monte Alegre do Sul and São João da Boa Vista). Blood samples were obtained with the animals anesthetized through association of 2% xilazine chloridrate and 1% ketamine chloridrate, in the doses of 4.5mg/kg/pv and 5.0mg/kg/pv respectively. The blood was collected using tubes containing EDTA. To determine the number of erythrocytes and leukocytes was used the traditional methodology of the Neubauer chamber. The hematocrit was determined by the microhematocrit method and the hemoglobin by the cianometahemoglobin. For leukocyte differential count the Shilling's method was used. The hematimetric (MCV, MCH and MCHC) indexes were determined with the values found in the red serie. The results were: erythrocytes: 4.5 x10(6)/mul ± 0.2; hemoglobin: 13.5g/dl ± 0.7; hematocrit: 40.4% ± 2; MCV: 90.2fl ± 0.9; MCH: 30.1pg ± 0.7; MCHC: 33.3g/dl ± 1. In the leukocytes series: 5.3 x10³/mul ± 2; band neutrophil:1 % ± 2.1; segmenter: 36.6 %± 19.9; eosinophils: 3.5% ± 11.7; basophiles: 0%; lymphocytes: 58.8% ± 19.6; monocytes: 1.5% ± 2.1. Myelocytes and metamyelocytes were not found.

A febre maculosa é mundialmente reconhecida como um problema reemergente de saúde pública. Na região de Campinas-SP, observam-se uma ampliação da área de transmissão do agente da doença e a ocorrência de um maior número de casos confirmados nos últimos anos. Nesta região, a maioria dos casos desta doença está quase sempre relacionada com o aumento populacional de capivaras, que são um dos principais hospedeiros primários do estádio adulto do carrapato Amblyomma cajennense. O principal objetivo deste estudo foi determinar o comportamento populacional de larvas, ninfas e adultos de Amblyomma spp no habitat de mata ciliar de uma área endêmica. De novembro de 2000 a outubro de 2002, carrapatos de vida livre foram coletados com armadilhas de CO2. Picos populacionais de larvas do gênero Amblyomma se estenderam por praticamente todos os meses do ano. Ninfas do gênero Amblyomma ocorreram o ano todo na mata ciliar, sendo mais abundantes de julho a dezembro. Adultos de A. cajennense foram mais abundantes na estação de primavera e verão. Adultos de A. dubitatum (=Amblyomma cooperi) apresentaram um padrão sazonal diferenciado, com os maiores picos populacionais ocorrendo de agosto a fevereiro.

Spotted fever is recognized worldwide as a reemerging public health problem. In Campinas region, state of São Paulo, the transmission area has expanded and the number of positive cases has increased in the lastest years. In these region most cases are usually related to the increased number of capybaras, which are one of the main primary hosts for the tick Amblyomma cajennense. The main objective of this study was to determine the seasonal dynamic of larvaes, nymphs and adults of Amblyomma species in a gallery forest. From November 2000 to October 2002 free-living ticks were collected using carbon dioxid traps. Larvae of Amblyomma spp were abundant during almost all months. Nymphs of Amblyomma spp occurred during the whole year and were more abundants from July to December. Adults of A.cajennense were more abundants during the spring-summer months. Adults of A. dubitatum showed higher populational peaks from August to February.

O Município de Campinas situa-se em região endêmica para febre maculosa brasileira do Estado de São Paulo, onde vários casos desta doença vem ocorrendo. Capivaras têm sido associadas ao ciclo dessa riquetsiose por apresentarem sorologia positiva e serem hospedeiras de carrapatos Amblyomma spp principais vetores da doença. Carrapatos foram coletados no parque urbano do Lago do Café, Campinas, SP, local associado a casos humanos suspeitos de febre maculosa brasileira, sobre a vegetação e das capivaras ali presentes, e pesquisados quanto à presença de riquétsias pela reação em cadeia da polimerase e pelo teste de hemolinfa. Adultos de Amblyomma cajennense e Amblyomma cooperi albergavam Rickettsia bellii, não patogênica, identificada pela análise das seqüências de nucleotídeos do gene gltA, porém, não foram constatadas riquétsias do Grupo da Febre Maculosa. Estes resultados associados à ausência de um isolado de riquétsias do Grupo da Febre Maculosa de capivaras indicam que seu papel, enquanto reservatório, necessita de maior investigação.

The city of Campinas is located in an endemic area for brazilian spotted fever in São Paulo State, where several cases have recently occurred. Capybaras have been associated with the cycle of this disease, for they present positive serology and serve as host for ticks of the genus Amblyomma, the main vectors of brazilian spotted fever. Ticks were colleted both from Capybaras and from the vegetation in the city park Lago do Café, located in the urban area of Campinas city, SP, a site associated with suspected human cases of brazilian spotted fever. The ticks collected were examinaded for the presence of rickettsiae using polymerase chain reaction and the haemolymph test. Through analysis of the gene gltA nucleotide sequence, adults of Amblyomma cajennense and Amblyomma cooperi were found to be infected with the non pathogenic Rickettsia bellii. However, no rickettsiae of the spotted fever group were detected. These results indicate that the role of capybaras as reservoirs of rickettsiae of the Spotted Fever group is still uncertain and further studies are required.

A febre maculosa brasileira foi detectada pela primeira vez no Estado de São Paulo em 1929. No entanto, não há registro sistemático de casos neste Estado. Em 1985 ocorreram três casos desta doença no Município de Pedreira, situado na região de Campinas, que fica no nordeste do Estado de São Paulo, Brasil, correspondendo à 5ª Região Administrativa, e compreendendo 88 municípios. Alguns estudos foram realizados no Município de Pedreira, mas a falta de registro de casos foi um obstáculo encontrado. Com a finalidade de recuperar o histórico da doença, resolveu-se pesquisar e registrar as ocorrências de febre maculosa na região no período de 1985 a 2000 e analisar o seu comportamento. Foram recuperados todos os registros da doença nos diversos serviços de saúde pública. Observou-se uma ampliação da área de transmissão e a ocorrência de um aumento dos casos suspeitos a partir de 1996, ano em que a doença foi determinada como de notificação compulsória na região. Esta doença foi causa de óbito na maioria dos anos do período de estudo. Conclui-se que a febre maculosa está em ascensão na região e estudos bioecológicos complementares estão sendo desenvolvidos para melhor compreensão da epidemiologia dessa doença, que é mundialmente reconhecida como um problema emergente de saúde pública.

Brazilian spotted fever was detected for the first time in the State of São Paulo in 1929. However, there is no systematic reporting of the disease in the State. In 1985, three cases of the disease occurred in the municipality of Pedreira, located in the Campinas Region, belonging to the 5th Administrative Region, in the Northeast part of the State, including 88 municipalities. An investigation was conducted at the time, but the lack of case registry limited its scope. The present study was undertaken with the aim of recovering the history of the disease in the Region. Data recovered from several public health services for 1985-2000 were used to analyze incidence patterns. It was observed that the transmission area expanded and the number of suspected cases increased, especially after 1996, when mandatory reporting was established. Deaths due to spotted fever were observed in most of the years under study. The study concluded that spotted fever incidence is increasing in the Campinas Region. Complementary bio-ecological studies are currently under way to better understand the epidemiology of this disease, recognized worldwide as an emerging public health problem.

A febre maculosa brasileira foi detectada pela primeira vez no Estado de São Paulo em 1929. No entanto, não há registro sistemático de casos neste Estado. Em 1985 ocorreram três casos desta doença no Município de Pedreira, situado na região de Campinas, que fica no nordeste do Estado de São Paulo, Brasil, correspondendo à 5ª Região Administrativa, e compreendendo 88 municípios. Alguns estudos foram realizados no Município de Pedreira, mas a falta de registro de casos foi um obstáculo encontrado. Com a finalidade de recuperar o histórico da doença, resolveu-se pesquisar e registrar as ocorrências de febre maculosa na região no período de 1985 a 2000 e analisar o seu comportamento. Foram recuperados todos os registros da doença nos diversos serviços de saúde pública. Observou-se uma ampliação da área de transmissão e a ocorrência de um aumento dos casos suspeitos a partir de 1996, ano em que a doença foi determinada como de notificação compulsória na região. Esta doença foi causa de óbito na maioria dos anos do período de estudo. Conclui-se que a febre maculosa está em ascensão na região e estudos bioecológicos complementares estão sendo desenvolvidos para melhor compreensão da epidemiologia dessa doença, que é mundialmente reconhecida como um problema emergente de saúde pública.

Brazilian spotted fever was detected for the first time in the State of São Paulo in 1929. However, there is no systematic reporting of the disease in the State. In 1985, three cases of the disease occurred in the municipality of Pedreira, located in the Campinas Region, belonging to the 5th Administrative Region, in the Northeast part of the State, including 88 municipalities. An investigation was conducted at the time, but the lack of case registry limited its scope. The present study was undertaken with the aim of recovering the history of the disease in the Region. Data recovered from several public health services for 1985-2000 were used to analyze incidence patterns. It was observed that the transmission area expanded and the number of suspected cases increased, especially after 1996, when mandatory reporting was established. Deaths due to spotted fever were observed in most of the years under study. The study concluded that spotted fever incidence is increasing in the Campinas Region. Complementary bio-ecological studies are currently under way to better understand the epidemiology of this disease, recognized worldwide as an emerging public health problem.